Hướng dẫn cách pha Hydroxide trong phân tích sắc ký ion
Hướng dẫn cách pha thủ công pha động Hydroxide ( NaOH/KOH) dùng trong chạy sắc ký ion nói chung và sắc ký ion Dionex nói riêng:
1.Tại sao sử dụng pha động Hydroxide ( NaOH/KOH):
-Đường nền tổng sau khi triệt nền ( Total signal) thấp hơn so với pha động Carbonate ( thường khoảng 25uS), còn hydroxide khoảng 2uS ( Tùy vào nồng độ pha động, tốc độ dòng và dòng điện áp cho bộ triệt nền loại điện hóa)
-Những cột chạy pha động hydroxide thường cho peak hình dạng ( peak shape) tốt hơn đồng nghĩa với số đĩa lý thuyết cao hơn.
– Sự kết hợp 2 yếu tố trên dẫn đến cột chạy pha động hydroxide cải thiện LOD hơn.
2.Nhưng khi pha động hydroxide ( NaOH/KOH) có một số vấn đề sau đây mà ta nên chú ý:
– Hydroxide dễ hấp thụ carbonate, mà carbonate là pha động rửa giải mạnh hơn hydroxide.
– Nếu pha động hydroxide nhiễm carbonate thì sẽ gây ra một số vấn đề sau:
+ Thay đổi thời gian lưu của peak phân tích.
+ Đường nền tổng tăng.
+ Xuất hiện peak ảo ảnh hưởng các peak khác.
+ Tạo kết tủa ( một số bazơ không tan của carbonate)
3. Những điều không nên làm khi pha thủ công pha động hydroxide:
-Không và không bao giờ dùng hydroxide dạng viên để cân và pha pha động hydroxide.
-Nếu bình pha động hydroxide trộn đệm dung môi hữu cơ thì không nên bảo quản bằng cách cung cấp khí trơ (không nên Blanket bằng Nitơ hay Heli tinh khiết ).
-Không nên dùng bình pha động hydroxide pha thủ công lâu hơn 1 tuần ( tùy nồng độ pha và bảo quản bằng cách cung cấp khí trơ (Blanket bằng Nitơ hay Heli tinh khiết )
4. Những điều chú ý nên làm khi pha thủ công pha động hydroxide để hạn chế tối đa carbonate hấp thụ vào pha động hydroxide:
– Sử dụng dung dịch dạng lỏng 50% hydroxide ( loại cho Sắc ký ion ( IC) của Sigma hoặc Fisher ) khi pha thủ công pha động hydroxide ( nhằm hạn chế carbonate). Và nên dùng bình nhỏ 50% hydroixide để pha pha động dùng chạy.
– Khi rút dung dịch 50% hydroxide từ lọ nên dùng pipet ( loại plastic) hút từ phần ở giữa không nên hút từ phần trên mặt hoặc ở đáy.
-Nước sử dụng để pha là nước deion water Type 1 ( 18.2Mohm.cm-1) được siêu âm đuổi khí kỹ trước khi dùng pha pha động hydroxide.
-Khi cho dung dịch 50% hydroxide vào bình nước deion water Type 1 nên để đầu pipet dưới bề mặt nước.
– Bịch kín bình pha động hydroxide ngay khi pha xong.
– Pha động hydroxide sau khi pha để chạy nên được bảo quản bằng cách cung cấp khí trơ ( Blanket bằng Nitơ hay Heli tinh khiết ) bảo vệ để nhằm hạn chế carbonate.
5. Ví dụ: Pha 1 lít pha động Hydroxide- NaOH 200mM:
-Lấy bình định mức 1 lít cho 800ml nước deion water Type 1 vào và siêu âm kỹ trước.
-Sau đó dùng pipet 5ml hoặc 10ml với vạch chia 0.1mL loại plastic hút 10.4ml dung dịch NaOH 50% (dùng cho IC của Sigma hay Fisher ) cho vào bình định mức 1 lít trên, khuấy hoặc siêu âm nhanh 15-30 giây rồi định mức tới 1 lít.
-Ngay lặp tức cho sang bình pha động dùng chạy máy sắc ky ion và blanket bằng nitơ hay heli tại 5 đến 8psi.
-Dung dịch pha động NaOH 200mM tốt nhất nên pha mới sau mỗi tuần hoặc khi mất khí Nitơ hay heli blanket quá 15 phút.
6. Đối với những anh chị và các bạn nào đang dùng pha động KOH/NaOH tạo online Model: EG với các cục Cartridge KOH/NaOH cùng hệ thống pump 4 kênh gradient:
-Mà hết Catridge KOH/NaOH và không muốn dùng nữa ( vì cục cartride không rẻ tí nào ạ) thì có thể chuyển qua pha pha động pha tay với hướng dẫn như trên và dùng 2 bình pha động để tạo chương trình gradient để chạy, 1 bình là KOH/NaOH 200mM và 1 bình là Deion Water Type 1 ( 18.2Mohm.cm-1) thì vẫn chạy với kết quả chính xác và lặp lại ạ! ( Hầu hết các testing lab lớn ở miền nam đều dùng pha động hydroxide pha tay như trên )
– Sau khi chuẩn bị xong pha động pha tay như trên xong. Anh chị và các bạn chỉ cần vào thay đổi cấu hình trong Serve configuration của phần mền Chromeleon để bỏ cục module EG, rồi tạo lại program file là chạy bình thường ạ.
[Nguồn Mr.Trung Sắc Ký Ion]